間充質干細胞成骨誘導分化試劑盒
,成骨誘導液
貨號：YJ-MSCYD-002
價格： 1280.0
規格： 100ml 200ml
產品描述
本產品為團隊精心優化的間充質干細胞成骨誘導分化試劑盒，可增強間充質干細胞向成骨細胞分化的能力。
本產品僅用于科研用途，不可用于診斷、治療、臨床、家庭及其他用途。
產品組成成分及保存
試劑名稱 | 體積（100mL規格/200mL規格） | 保存條件及有效期 |
誘導分化添加劑 | 5mL / 10mL | -20℃，1 Year |
優質胎牛血清 | 10mL / 20mL | -20℃，1 Year |
細胞基礎培養基 | 85mL / 170mL | 4℃，1 Year |
茜素紅染色液 | 5mL / 10mL | RT（室溫），1 Year |
注意：1.為保證產品的有效性，請避免反復凍融。
2. 配制好的誘導培養基保存于2-8℃，有效期為2周，請根據實驗用量合理配制。
產品使用說明
1. 間充質干細胞成骨誘導分化完全培養基的配制
① 室溫條件下融化添加劑及血清。（注意：若添加劑或血清中有沉淀物，屬正常現象，無須過濾，避免成分丟失。）
② 根據實驗用量，于無菌操作臺中配制完全培養基，建議每次配制50mL，先加細胞基礎培養基和胎牛血清，再加誘導分化添加劑。（配制比例見表一）
試劑成分 | 配制比例 | 50mL配制體系 |
誘導分化添加劑 | 5% | 2.5mL |
優質胎牛血清 | 10% | 5mL |
細胞基礎培養基 | 85% | 42.5mL |
表一
2. 間充質干細胞成骨誘導分化實驗步驟
①包被細胞培養瓶/板：向細胞培養器皿中加入0.1%明膠溶液，輕微晃動，使包被液完全覆蓋培養器皿底面，置于37℃培養箱中孵育30min，吸除液體即可使用。
②建議取第3~5代、純度達90%以上、狀態良好的間充質干細胞，將其消化收集，使用含10%FBS的完全培養基調整細胞濃度，均勻鋪于包被好的培養瓶/板中，置于37℃，5%CO2，飽和濕度的培養箱中培養。（細胞接種詳情參考表二）
培養器皿 | 底面積 | 細胞量 | 培養液體積 |
24孔培養板 | 2cm/孔 | 2×105cell/孔 | 1mL/孔 |
12孔培養板 | 4.5cm/孔 | 4.5×105cell/孔 | 2mL/孔 |
6孔培養板 | 9.6cm/孔 | 9.6×105cell/孔 | 2mL/孔 |
T25培養瓶 | 25cm | 25×105cell | 5mL |
6cm培養皿 | 21cm | 21×105cell | 5mL |
10cm培養皿 | 55cm | 55×105cell | 10mL |
表二
③待細胞匯合度達約90%時，即可進行誘導分化。
④小心吸棄細胞培養上清，沿孔壁緩慢加入提前配制好的誘導分化完全培養基，置于37℃恒溫細胞培養箱中培養。
（注意：完全培養基加入細胞前需提前置于37℃預熱。）
⑤每2~3day換用新鮮的誘導分化完全培養基。換液時，若細胞培養上清顏色變為澄清的黃色，是由于細胞量較大，營養消耗較快導致的，請及時縮短換液周期。
⑥細胞誘導2~4周后，即可進行茜素紅染色鑒定。（注意：請在顯微鏡下確認鈣結節形成后，再進行染色鑒定。）
3. 茜素紅染色分析
① 細胞誘導分化結束后，小心吸棄細胞培養上清，1×PBS潤洗1~2次，室溫固定30 min。（細胞固定液為4%中性甲醛溶液等，體積參考表二）
② 吸棄細胞固定液，1×PBS潤洗2次。沿孔壁緩慢加入茜素紅染色液，染液體積請參考表二，室溫染色30min。（注意：染色液底部可能會有沉淀，吸取時盡量不要觸及底部。若細胞染色后有沉淀，1×PBS洗去即可。）
③ 吸出染色液，1×PBS潤洗，去掉浮色。顯微鏡下觀察細胞染色效果，鈣鹽呈較深的橙紅色。（注意：染色液可重復使用，建議收集。）
質量控制
無菌檢測（細菌、真菌和支原體檢測）
pH測試
滲透壓檢測
內毒素
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注意事項
僅限科研用。
培養體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養體系的液體和有培養體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
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