布魯氏菌病抗體檢測試劑盒 使用說明書 【介紹】 布魯氏菌病（brucellosis，Bru，布病）抗體檢測試劑盒用于檢測牛、羊、豬、犬等動物血清中的布魯氏菌抗體。 本試劑盒采用競爭ELISA法，在酶標板條微孔上預包被布魯氏菌抗原。在試驗中，加入稀釋液、待檢血清與酶結合物，經過溫育后，若樣品中含有布魯氏菌特異性抗體，則與酶結合物中的酶標記抗體競爭板孔中包被的抗原表位，溫育后將多余的游離抗體通過洗滌去除；在微孔中加入TMB顯色液，經酶催化產生的藍色信號與樣本中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應后，用酶標儀450nm波長測定反應孔中的吸光度A值。 【組份】 1 | 抗原預包被板條 | 1/2塊 | 7 | 終止液 | 6/11ml | 2 | 酶結合物 | 10/20ml | 8 | 陰性對照 | 200ul | 3 | 10倍濃縮洗滌液 | 100ml | 9 | 陽性對照 | 60ul | 4 | 顯色液 | 11/22ml | 10 | 封板膜 | 2/4張 | 5 | 樣本稀釋液 | 100ml | 11 | 說明書 | 1份 | 6 | 稀釋板 | 1/2塊 | | | |
【需自備的設備及試劑】 - 微量移液器：10µl-100µl、100µl-1000µl。
- 一次性移液器吸頭。
- 量筒：500ml。
- 96孔板酶標儀。
- 蒸餾水或去離子水。
- 洗瓶或洗板機。
【樣品制備】 取動物全血，按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。 【洗滌液的準備】 濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫，如有鹽結晶，搖動使結晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。 【注意事項】 - 試劑盒使用前各試劑應平衡至室溫，應將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應搖勻，使用后放回2-8℃。
- 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時應防止試劑污染。
- 顯色液和終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應該注意防護。
- TMB（顯色液）不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。
- 檢測板拆封后應避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。
- 所有廢棄物在丟棄之前應合理處理以免污染。
- 嚴格遵守操作說明可以獲得zui好的結果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須。
- 抗原包被板為一次性用品，不得重復使用；
【操作步驟】 - 在稀釋板上按1：40稀釋待檢血清樣本以及陰陽性對照品（195µl樣本稀釋液+5µl樣本血清），并吹打均勻
- 取預包被的檢測板（根據樣品多少，可拆開分次使用），將稀釋好的待檢血清取20µl加入到檢測板孔內。同時設陰性對照2孔，陽性對照1孔，取陰性及陽性稀釋液各20µl分別加入反應孔中。
- 然后再加酶結合物80µl/孔，加入反應孔中輕微震蕩混勻（勿溢出），蓋上封板膜，置37℃溫育60分鐘。
- 小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內液體，以上步驟重復4-6次，zui后在干凈吸水紙上拍干。
- 每孔加顯色液100µl，混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色15分鐘。
- 每孔加終止液50μl，使反應終止，10分鐘內測定結果。
【結果判定】 用酶標儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。 試驗成立的條件是： 陰性對照(N)OD值>0.5，同時陽性對照(P)阻斷率>80%； 計算方法： PI (阻斷率)= {1 —（樣品OD值 ÷ 陰性OD均值）}×100% 陰陽性判斷： PI(阻斷率)>70%則判斷為陽性； PI≤70%則判斷為陰性。 【有限期】 貯存方法： 2 - 8ºC下貯存。 有效期： 12個月。 |
