植物葉綠素類,胡蘿卜素含量試劑盒說明書微量法 |
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植物葉綠素、類胡蘿卜素含量試劑盒說明書 微量法注意：正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。 測定意義 植物葉綠素、類胡蘿卜素廣泛存在于綠色植物組織中，其含量與光合作用、營養(yǎng)狀況密切相關(guān)，是反應(yīng)植物生長狀況的重要指標。 測定原理 根據(jù)葉綠體色素提取液對可見光譜的吸收，在某一特定波長測定其吸光度，即可用公式計算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C 和液層厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常數(shù)。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長下的吸光系數(shù)可通過測定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長下的吸光度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)， 則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長下吸光度的總和。這就是吸光度的加和性。測定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量，只需測定該提取液在三個特定波長下的吸光度A，并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測定葉綠素a、b時為了排除類胡蘿卜素的干擾，所用單色光的波長選擇葉綠素在紅光區(qū)的最大吸收峰。 自備實驗用品及儀器 天平、研缽、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、10mL玻璃試管，錫箔紙。 試劑組成和配制 提取液：液體 1000mL，4℃保存。（自備，無水乙醇：丙酮=1:2） 試劑一：石英砂×1 瓶，4℃保存。 測定操作 1. 稱取約新鮮植物葉片或其它綠色組織，去掉中脈，稱取約 0.1g，剪碎，用蒸餾水洗干凈。 2. 加入1mL蒸餾水，少量試劑一（約 50mg），在黑暗或弱光條件下充分研磨，轉(zhuǎn)入10mL玻璃試管。 3. 用提取液沖洗研缽，將所有沖洗液轉(zhuǎn)入玻璃試管，用提取液補充至10mL，玻璃試管置于黑暗條件下或者包上錫箔紙浸提3h，觀察試管底部組織殘渣*變白則提取*，若組織殘渣未*變白，繼續(xù)浸提至其*變白。 4. 取浸提液200μL于微量石英比色皿/96孔板，提取液調(diào)零，測定663nm、645nm和470nm處吸光值，分別記為A663、A645 和A470。 計算公式 微量石英比色皿計算方法： 葉綠素a含量（mg/g）=（12.7× A663-2.69×A645）×V 提×D÷m÷1000 = 0.01×（12.7×A663-2.69×A645）×D÷m 葉綠素b含量（mg/g）=（22.9×A645-4.68×A663）×V 提×D÷m÷1000 = 0.01×（22.9×A645-4.68×A663）×D÷m 葉綠素總含量（mg/g）=（20.21×A645+8.02×A663）×V 提×D÷m÷1000
= 0.01×（20.21×A645+8.02×A663）×D÷m 類胡蘿卜素濃度（mg/g）=【（1000A470-3.27Ca-104Cb）÷229】×V 提×D÷m÷1000 =0.01×【（1000A470-3.27Ca-104Cb）÷229】×D÷m
96孔板計算方法： 葉綠素a含量（mg/g）=2×（12.7× A663-2.69×A645）×V 提×D÷m÷1000 = 0.02×（12.7×A663-2.69×A645）×D÷m 葉綠素b含量（mg/g）=2×（22.9×A645-4.68×A663）×V 提×D÷m÷1000 = 0.02×（22.9×A645-4.68×A663）×D÷m 葉綠素總含量（mg/g）=2×（20.21×A645+8.02×A663）×V 提×D÷m÷1000 = 0.02×（20.21×A645+8.02×A663）×D÷m 類胡蘿卜素濃度（mg/g）=2×【（1000A470-3.27Ca-104Cb）÷229】×V 提×D÷m÷1000 =0.02×【（1000A470-3.27Ca-104Cb）÷229】×D÷m V 提：提取液體積，10mL；D：稀釋倍數(shù)；m：樣本質(zhì)量，g 注意事項 1. 色素對光敏感，研磨和提取等操作盡量避光或者在弱光下進行。 2. 一定要浸提至組織殘渣*變白，否則提取不充分。 3. 用提取液沖洗研缽一定要沖洗至所有的綠色物質(zhì)被轉(zhuǎn)移至玻璃試管。 4. 測定時吸光值超過 1，可進行適當稀釋。 從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù)，協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色，是客戶您值得信賴的科研合作伙伴! 如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。
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